Помощь - Поиск - Пользователи - Календарь
Полная версия: Микроклональное (меристемное) размножение сенполий.
Forum Kwetki.ru > Многообразие геснериевых > Сенполии (Фиалки)
Страницы: 1, 2
Mirek
Открываю тему сама, так как человек, которого это очень и очень интересует, не решается сам это сделать. Надеюсь, что появятся конкретные вопросы по данной теме. Прошу всех делиться не только своими знаниями, но, по возможности, давать ссылки на материалы в сети, если что-то встретилось по данному вопросу.
Пчеловодов Леонид
Да, это тема действительно очень интересна и актуальна. Думаю, что сначало надо рассказать что это такое, а то может не все это знают.
Меристемное размножение - метод размножения растений, при котором клетки меристемы необходимо поместить в специалбную питательную среду. Из этих клеток потом образуются новые растеньица. Этот способ размножения в основном применяется в коммерческих целях, т.к. из одного листа можно получить ни несколько деток(как при традиционном размножении), а несколько десятков.
Сам процесс наверное очень интересный, но сам не пробовал.
Пчеловодов Леонид
Надя, вот и ссылочка нашлась, правда сам ещё не смотрел этот адрес:
http://www.nevskaya-fialka.spb.ru/stat_dz.htm
Ямира
Mirek, а почему эта тема вызывает у тебя столь живой интерес? wink.gif

Приведу здесь небольшую цитату, взятую из книжки Н.Ф. Андреевой "Узамбарские фиалки":

"Размножение in vitro

Сенполию можно размножить in vitro (в пробирке) с использованием методики микроклонального размножения. Этот метод применяется для промышленного разведения сенполий.

Листовую пластинку или цветонос разрезают в лабораторных стерильных условиях на мелкие части, и из каждой части выращиваются новые растения. При этом размножение происходит через образование адвентивных почек, процесс идет на стерильной питательной среде.

Таким образом из одного листа можно получить несколько сотен растений. Цикл развития в лаборатории - около 6-8 месяцев. А затем только опытный любитель или профессионал сможет благополучно приучить "лабораторных деток" к обычным условиям жилого помещения."

И вот в свете вышенаписанного лично я с трудом представляю, как можно в домашних условиях обеспечить и поддерживать "стерильные условия" в течение 6-8 месяцев для нескольких сотен растений...
Mirek
Yamara, признаюсь: это заказанная тема. Есть человечек, который или не очень форум еще освоил, или сам не решался открыть тему - вот я и помогла. Знаю, что очень интересует его этот вопрос. А так как я, действительно, только вскользь читала о меристеме, то не особо смогу сама рассказать.

К тому же, один из участников нашего форума обещал со временем рассказать о приготовлении и использовании препаратов для данного дела в домашних условиях.
Женя
Здравствуйте! Хотел бы поделится своими «наблюдениями» по поводу микроклонального размножения фиалок в частности. Проштудировал много информации, но также накопилось довольно много пока ещё неразрешённых вопросов! smile.gif Но перейдём к делу. Одним из направлений биотехнологии растений является разработка и внедрение технологий клонального микроразмножения в производство -получение в условиях in vitro (в пробирке), неполовым путем растений, генетически идентичных исходному экземпляру. В основе метода лежит уникальная способность растительной клетки реализовывать присущую ей тотипотентность, т.е. под влиянием экзогенных воздействий давать начало целому растению. Этот метод имеет ряд преимуществ перед существующими традиционными способами размножения: 1) получение генетически однородного материала; 2) освобождение растений от вирусов и грибных болезней, а также от паразитических организмов; 3) высокий коэффициент размножения (105-107 ед. - для травянистых, цветочных растений, 104-105 ед. -для кустарниковых древесных, 104 ед. - для хвойных в год); 4) сокращение продолжительности селекционного периода; 5) ускорение перехода растений от ювенильной к репродуктивной фазе развития; 6) размножение медленно растущих и плохо размножаемых традиционными способами растения; 7) возможность проведения работ в течение круглого года и экономия площадей, необходимых для выращивания маточного посадочного материала.
Для размножения понадобится cool.gif : макроэлементы(P,N,K,S соли К+, Na+, Са++, Мg++ )
микроэлементы(Железо, цинк, марганец, молибден),
источники железа,
витамины(В (В1, В6, В12), С (аскорбиновую кислоту), РР (никотиновую кислоту), мезоинозит),
источники углерода(сахароза или моноуглеводы: глюкоза, фруктоза), фитогормоны(В биотехнологических исследованиях чаще используют гормоны, стимулирующие рост и развитие: ауксины, цитокинины, гиббереллины.
Ауксины: ИУК – -индолил-3-уксусная кислота, ИМК – индолил-3-мас-ляная кислота, НУК – (альфа)-нафтилуксусная кислота, 2,4-Д – 2,4-дихлорфенокси-уксусная кислота.
Цитокинины: кинетин – 6-фурфуриламинопурин(кинетин), зеатин, NN-дифенил-мочевина, 6-БАП – 6-бензиламинопурин.
Гиббереллины: гиберрелловая кислота).
Все вещества добавляются строго согласна концетраций среда Мурасиге-Скуга. (если будут желающие напишу точную концентрацию smile.gif ).
Этапы клонирования: (см. ссылку на указанный сайт): http://www.bugira.ru/stat/meristema/meristema.html
Женя
Ещё интересная статья:"Выращивание африканских фиалок из листовой ткани" http://senpolia.tskm.ru/publication/place/...a/tissue1.shtml
Нажмите для просмотра прикрепленного файла Выпуклости и зачатки ростков на поверхности и по краю кусочка листа
а вот её продолжение http://senpolia.tskm.ru/publication/place/...a/tissue2.shtml
Нажмите для просмотра прикрепленного файла Подросшие побеги на кусочке листа
Нажмите для просмотра прикрепленного файла Иногда весь кусочек полностью покрыт побегами.

Все данные взяты из интернета и из других форумов!

Конечно, в домашних условиях произвести «грамотное» микроклонирование сложно, т.к. нужна полная стерильность! Если попадёт пылинка – всё пропало, будет расти патогенная среда. ohmy.gif Мне повезло, у меня мама медик, поэтому стерильный бокс, ультрафиолетовые лампы и автоклавы – в моём распоряжении. biggrin.gif tongue.gif tongue.gif
Женя
И ещё хотел сказать smile.gif , мне понравилось пару статей расположенных на сайте http://senpolia.tskm.ru/index.html
Некоторую информацию я просто процитирую, там очень хорошо и интетересно написано biggrin.gif

"К сожалению, не часто у любителей фиалок есть возможность поближе познакомиться с микроклональным способом размножения растений.
Мы пользуемся этим методом уже 4 года. Сейчас с полной ответственностью можно сказать, что все возложенные надежды оправдались.
Фиалочки как были фиалками так ими же и остаются и не превращаются ни во что иное :-) Все сортовые качества сохраняются вполном объёме.
Продуктивность этого способа очень высокая, судите сами — за 3-4 месяца с 1 листика мы получаем от 100 до 500 новых розеток. И что самое интересное — дорого обходится если произвести 50 деток, но совсем дёшево-если 300-400 и выше ;-)
Через месяц после закладки листиков на специальную питательную среду на них начинают образовываться маленькие детки. Посмотрите фото".Нажмите для просмотра прикрепленного файла Данная информация находится на http://forum-senpolia.tskm.ru/zebra/cgi-bin/zf.cgi?mid=46D53

"У кого не было первого печатьного опыта с фиалочками с пёстрой листвой?
Помню первый купленый мной листик с красивой пестролистной розетки так и не смог дать деток. Дело в том, что чем больше белых участков на листике, тем меньше хлорофилла, значит листик не может синтезировать для себя питательные вещества в достаточном количестве... а итог один.
А когда мы этого красавчика помещаем на питательную среду, ситуация меняется к лучшему- листик полностью обеспечен пищей, так что ему остаётся только одно-образовывать новые детки.
Посмотрите какая красивая практически белая детка выросла на одном из пестролистных листиков, заложенных на размножение"Нажмите для просмотра прикрепленного файла это находится на http://forum-senpolia.tskm.ru/zebra/cgi-bin/zf.cgi?mid=46D59
"А этот малыш образовал так много деток, просто герой! И при этом сам остался свеженьким и хорошеньким.
Как видите, детки образуются так же как и при обычном способе размножения, только выживают все, а не 1-2"Нажмите для просмотра прикрепленного файла это находится на http://forum-senpolia.tskm.ru/zebra/cgi-bin/zf.cgi?mid=46D5D
Хотелось бы поблагодарить Dashu, котторая написала вышеуказанную информацию про микроклонирование и за её красивые фотографии! biggrin.gif
SergeyA.
Как я профукал тему...
Уважаемый Евгений. Какие у Вас неразрешеные вопросы? Задавайте, а мы попробуем ответить.
А я пока вкратце добавлю.
Коэффициент размножения в культуре in vitro и вообще возможность растительной клетки делиться напрямую зависит от состава среды. В биотехнологии растений применяют не только среду MS. Помимо среды Мурасиге-Скуга используются среда Кнудсона, среда Блейдза, Гамборга, Гамборга-Эвелега, Уайта, Чапека, Хеллера, Шенка-Хильдебрандта и прочие, а также их бесчисленные модификации. Именно эти модификации(а точнее их подбор) являются одной из самых сложных частей работы по микроклональному размножению. Ведь их надо разработать! Для многих трудноразмножаемых растений(в особенности древесных) с "плохой" тотипотентностью клеток(которая оказывается разной для разных типов тканей) большая часть успеха зависит именно от модификации среды. Состав таких сред, как правило, разрабатывается эмпирически, являясь собственным ноу-хау фирмы и держится в строгой тайне. Для большинства травянистых и более примитивных растений(для сенполий в том числе) неплохо подходят и не модифицированные среды. Но тут есть свои подводные камни... Существует т.н. сомаклональная изменчивость. У травянистых растений она проявляется довольно часто. Благодая ей вы легко теряете сорт. Сорт также теряется при размножении химерных растений. И это надо учитывать перед тем, как отправить ратение в пробирку.
Что касается ламинар-бокса и методов стерилизпции рабочего пространства, то тут вопросов, я думаю, быть не должно.
Проблемы могут возникнуть при поиске необходимых реактивов. Их в хозтоварах не купишь. Это проблема... но она решаема.
Проблема также возникнет при стерилизации эксплантов. Что для этого использовать? Одним из самых мягких и безопасных для растений, но в то же время надежным стерилизатором служит сулема. Но для человека она сильный яд. Сложнее работать с гипохлоритом, т.к. он сильно обжигает растительные ткани. Неплохих результатов можно достичь используя несколько стерилизующих агентов, например, нитрат серебра, пероксид водорода, этанол, гипохлорит кальция и др. Хорошими стерилизующими свойствами обладают призводные изотиазолинонов. Во всяком случае пути через пробу-ошибку не миновать.
Также необходимо запастись достаточным количеством стерильной дистиллированной воды для промывки эксплантов. С этим хорошо справляются мелкопористые фильтры или автоклав.
Предотвратить зарастание субстрата(которое неизбежно наступает всегда, даже при абсолютной стерильности рабочих условий) можно добавлением туда противогрибковых и противобактериальных препаратов. Говорят, особенно хороша Plant Preservative Mixture(PPM), специально для этого и созданная. Данная операция желательна, хотя и не обязательна.
Для начала хватит. Если возникнут вопросы - задавайте.
Полезные ссылки:
http://bio-technology.nm.ru/
http://www.biotechnolog.ru/
http://www.home.turbonet.com/kitchenculture/tcinfo.htm
http://www.succulent-tissue-culture.com/EN
http://www.liv.ac.uk/~sd21/tisscult/what.htm

И еще форум: http://molbiol.ru/forums/
Mirek
Стала искать ссылку на статью о данном методе применительно к орхидеям.

По пути встретилась информация по фиалкам: http://www.dimetris.com.ua/site/all/klon
http://www.dimetris.dp.ua/stat.php?subacti...amp;ucat=2&

А вот по орхидеям статью убрали. Жаль. Там был указан процесс подготовки растительного материала (в частности, стерилизация) к меристемному размножению.
SergeyA.
Elena. Теоретически так можно размножить ЛЮБОЕ растение, а практически - очень многие. Так размножают пелларгонии, бегонии, хосты, гейхеры и многие другие травянистые растения. Данный метод используется также и для размножения некоторых древесных растений. Поэтому вполне может быть, что и фикусы размножают так же.
Женя
Да, вот начал подбирать концентрацию цитокининов, а именно 6-бензиламинопурина(БАМ) – и уже подводный камень. huh.gif Одни говорят, что надо примерно 25мг/л (я думаю, что это сверх много), другие: 10-15мг/л, а в одном источнике вообще написано, что его надо 2 мг/л. Вот такая неразбериха, и, причём каждый говорит, что 25- много, 10-мало – непонятно мне что-то. blink.gif
А вот добавление ауксинов, обязательно? Знаю, что некоторые выращивают только на цитакининах (из гормонов). Причём много написано, особенно в диссертациях и научных работах, про взаимное влияние цитокининов и ауксинов. Если переборщить с ауксинами- рост вегетативной массы и корней (а мне этого не надо), если перебор цитокинина- прорастание почек (это мне как раз и надо). Что вы скажите, насчёт этих вопросиков?! Кстати, насчёт PPM, с Вами полностью согласен – хорошая вещь biggrin.gif , только у нас не продаётся, а аналогов ей я пока не нашёл. К тому же продаётся она ,видимо, только в Америке. Обработку, наверное, буду проводить стандартно: хлорсодержащим веществом (хлоркой) и спиртом, думаю, что всё получится! biggrin.gif А какие трудности у Вас возникали на практике? На какие моменты посоветовали бы особенно обратить внимание? Заранее, огромное спасибо!!! smile.gif
SergeyA.
Если Вы собираетесь размножать сенполии, то гормоны Вам вряд ли понадобятся. Такие растения прекрасно растут на безгормональной стандартной MS-среде. Это упрощает процесс...
Я не знаю кто там что говорит, но источники, которые Вы читали, наверняка посвящены отдельным видам растений и их методике культивирования на питательных средах. В этом случае не удивительны значительные расхождения в концентрациях. Ведь среда, как я писал раньше, зачастую подбирается индивидуально.
Характер роста растительной ткани на питательной среде действительно можно регулировать соотношением цитокининов и ауксинов. При относительно повышенной концентрации ауксинов наблюдается корнеобразование, при относительно высокой концентрации цитокининов - образование почек и побегов, а при приблизительно равных количествах обоих типов гормонов - каллусогенез. Но концентрации гормонов подбираются эмпирически в зависимости от вида растения и химической природы гормона.
Что касается PPM, то в соседнем магазине за углом ее не купишь, равно как и 6-БАП или минеральные соли необходимой чистоты. Все это надо искать, если есть желание конечно.
И по поводу проблем... Первое, на что следует обратить внимание - стерилизация эксплантов, точнее подбор концентрации и комбинации стерилизующих агентов. Второе - состав среды. Следует строго соблюдать тоничность и pH среды. Третье - это условия культивирования эксплантов(освещение, температура, влажность).
Женя
Цитата(SergeyA. @ 2.3.2007, 19:03) *

Если Вы собираетесь размножать сенполии, то гормоны Вам вряд ли понадобятся. Такие растения прекрасно растут на безгормональной стандартной MS-среде. Это упрощает процесс...
Я не знаю кто там что говорит, но источники, которые Вы читали, наверняка посвящены отдельным видам растений и их методике культивирования на питательных средах. В этом случае не удивительны значительные расхождения в концентрациях. Ведь среда, как я писал раньше, зачастую подбирается индивидуально.
Характер роста растительной ткани на питательной среде действительно можно регулировать соотношением цитокининов и ауксинов. При относительно повышенной концентрации ауксинов наблюдается корнеобразование, при относительно высокой концентрации цитокининов - образование почек и побегов, а при приблизительно равных количествах обоих типов гормонов - каллусогенез. Но концентрации гормонов подбираются эмпирически в зависимости от вида растения и химической природы гормона.
Что касается PPM, то в соседнем магазине за углом ее не купишь, равно как и 6-БАП или минеральные соли необходимой чистоты. Все это надо искать, если есть желание конечно.
И по поводу проблем... Первое, на что следует обратить внимание - стерилизация эксплантов, точнее подбор концентрации и комбинации стерилизующих агентов. Второе - состав среды. Следует строго соблюдать тоничность и pH среды. Третье - это условия культивирования эксплантов(освещение, температура, влажность).


Эти люди задимаюся специально микроклонированием фиалок! И расхождение странное, огромное! blink.gif А какую концентрацию добавляете вы ? biggrin.gif
Да, кстати, хватит им освещённости, если я их поставлю на стеллаж с цветами, на расстояние от ламп примерно 10-15 см?
Спасибо за ценные советы!!! biggrin.gif
SergeyA.
Я использую по 2 мг/л ИУК и карбанилида(использования последнего, к сожалению, не достаточно). Но повторюсь еще, что это эмпирически. Фиалками я не интересуюсь и не занимаюсь. Но я думаю, что нет необходимосто расходовать очень дорогостоящие цитокинины для культуры in vitro оных.
Освещение Вам необходимо замерить. Оно должно быть, как правило, не меньше 4000 lx(хотя некоторые растения культивируются в темноте).
Женя
Спасибо!
Только хотел бы уточнить по поводу цитокинина. Мне уже купили его (очень долго я его искал, но всё-таки нашёл, и очень рад biggrin.gif ), значит если вы добавляете 2 мг/л ИУК,то значит цитокинина примерна 5мг/л будет придостаточно (я имею в виду БАМ. А киненетина и того 10мг/л, его всегда больше добавляют по сравнею с БАМ).
А с освещением, у меня примерно на полке будет 2500-3500ln, думаю для них как раз...
Ruslan
Размножал колладиумы. Среды брал у меристемщиков-картофельщиков. Стирилизация - спирт и диацид, последовательно. На основе МС среды.

С сенполией все действительно еще проще. Есть множество упоминаний, что сенполию размножали на стандартной МС без гормонов. Есть упоминания, что использовали и безагаровые среды, с стириллизованной ватой, или сфагнумом, как наполнителями. Из личного опыта - если наполнитель вата - давление в автоклаве надо снижать оооочень медленно, иначе среда закипит и вытолкнет вату под тампон.

По организации процесса дома можно перенять опыт у орхидеистов. На эту тему у них масса информации. Нет автоклава - подойдет скороварка, нет ламинар-бокса - оборудуем кладовку, кварцуем.....

Еще, в этой теме не упомянули, что есть два способа микроклонального размножения - регенерация и мультипликация. Про регенерантов все знают, а мультипликанты, это растения полученные из уже заложенных почек. Т.е. мы сажаем цветонос с парой почек на среду и берем только те побеги, которые получены из почек над прилистниками. Они с высоким процентом вероятности передадут не только сортность, но и химерность. Добавив в среду чуток гиббереллинчика получаем вытянутые ювинильные побеги, а не розетки. Поделив, при следующем пассаже, такой побег так, чтобы на черенках было по одному лису (паре листьев) с участком стебля, мы получаем черенки с уже заложенными для мультиплицирования почками. и т.д.. Но следует заметить, что постепенно идет накопление отклонений, как при мультиплицировании, так и при клонировании.

Простой пример - клонируем фантазийный сорт, который дает 90% полной повторяимости.
Первая генерация 90% сорт и 10% спорты.
Не имея четких маркерных признаков для выбраковки спортов все потомство продолжаем клонировать.
Спорты дадут только спортов, а 90% сортовых снова разделятся на 90 и 10. 90% от 90 % - 81 %.
Итого уже во втором вегетативном поколении количество спортов увеличивается почти до 20%, в четвертом поколении спортами будут 1 из 3, и т.д. При мультипликации процесс будет происходить значительно медленнее.
Но, как говорил человек, размножавший сенполию клонально, она на столько сильно зарастает новыми побегами, что иногда очень трудно отличить мультипликантов от регенерантов.

Народ, есть идея, по продуцированию заданной химерности in vitro. У кого есть время, возможности и желание попробовать?
Женя
Руслан, что вы имеете в виду под словом продуцирование химер? Вообще-то у меня очень мало свободного времени, вернее его вообще нет. А вот заняться микроклонированием собираюсь как можно быстрее, думаю, что кконцу марта всё заделаю по чашкам Петри. К тому же мне передадут гормон!
Руслан, а у вас есть интересная и хорошая информация про клонирование? biggrin.gif
Ruslan
Именно это и имею в виду - получение новых химер в определенном проценте и с заданными цветовыми слоями тканей. Но методика требует определенного (вполне стандартного) оборудования, набора гормонов (потребуется минимум две среды с разным ауксин-цитокининовым соотношением) и опыта получения плотных каллусных масс сравнительно крупного размера без меристемизации (на какое-то время).

Литературу по клоналке не собирал. Для сенполий это не рентабельно. Свои маленькие эксперименты в этом направлении делал на базе лаборатории гетерозиса Института генетики и цитологии АН РБ. Но было это лет ... назад - 1990-1991г, а потому по соотношению веществ мало чего помню. Из того, что помню, могу сказать, что зачастую важна не столько концентрация отдельных гормонов, сколько соотношение оных.
На безагаровых средаж скорость диффузии веществ значительно выше, а потому могут быть использованы половинные концентрации всех веществ (но пересадки чаще). Если использовать в качестве примочек к среде органику - банановую пасту, кокосовое молоко, березовый сок (сразу после сбора замораживается и так хранится), то просто для размножения можно обойтись и более бедными средами, типа Кнудсона, или Кнопа, в качестве основы..

Важно не только знать составы сред и иметь оборудование. Не менее важно уметь им пользоваться в мелочах: как что держать и в какой руке, ничего не класть на стол, где должен стоять стакан со спиртом для обжига инструмента. где лежит чашка петри, чтобы накрыть спирт, если он вдруг вспыхнет.....
Чашки петри всегда значительно сильнее зарастают и очень зарастают после транспортировки.

Женя, Вы из Минска?
Женя
нет, я из Бреста.
Ruslan
Это хуже.
В Минске, я мог бы подсказать к кому подойти, и просто постоять за спиной того, кто клонирует растительный материал (картофель). Чтобы насмотреться на какие-то важные мелочи. У тех людей все отработано до автоматизма, до малейшей мелочи. Как вводить в культуру ( пожалуй, самый сложный момент), как вести пересадку со среды на среду.
Mirek
Только сейчас осенило, что у меня есть знакомые в лаборатории, расположенной на территории минского ботанического сада, занимающиеся культурами гербер, орхидей и ... забыла, чего еще. Это может чем-то помочь в данной ситуации.
Женя
Цитата(Mirek @ 13.3.2007, 6:41) *

Только сейчас осенило, что у меня есть знакомые в лаборатории, расположенной на территории минского ботанического сада, занимающиеся культурами гербер, орхидей и ... забыла, чего еще. Это может чем-то помочь в данной ситуации.

Надя, спасибо, думаю, что справлюсь сам. Ну, если что-то случится, буду иметь в виду, что у вас есть опытные знакомые и можно будет обратиться к ним за советом. Ещё раз спасибо!
Natali
Цитата(Женя @ 6.3.2007, 0:31) *

Спасибо!
Только хотел бы уточнить по поводу цитокинина. Мне уже купили его (очень долго я его искал, но всё-таки нашёл, и очень рад biggrin.gif ), значит если вы добавляете 2 мг/л ИУК,то значит цитокинина примерна 5мг/л будет придостаточно (я имею в виду БАМ. А киненетина и того 10мг/л, его всегда больше добавляют по сравнею с БАМ).
А с освещением, у меня примерно на полке будет 2500-3500ln, думаю для них как раз...


для размножения фиалок микроклонально среда для инициации образования адвентивных побегов -Мурасиге-Скуга, 0,15 мг/л БАП (бензиламинопурил) + 0,1 НУК (нафтилуксусная кислота), ИУК можно добавить больше (сделайте 2 концентрации - о, 5 и 1 мг/л. Стерилизующий агент - мы брали отбеливатель "Белизна" и разводили примерно в 3 раза (если он свежий), если открытый и постоявший - разводите раза в 2. Розетки регененерируют примерно через 3 недели. Потом их можно рассаживать уже на среде без фитогормонов, просто базовая МС. Удачи
Тома Калпак
Цитата(Женя @ 12.3.2007, 1:28) *

А вот заняться микроклонированием собираюсь как можно быстрее, думаю, что кконцу марта всё заделаю по чашкам Петри.

Женя ,Хочется спросить, дело-то продвигается, очень интересно
Пчеловодов Леонид
Тоже интересно, сам ведь такое никогда не соберусь сделатьsmile.gif))))
Mirek
Вот случайно наткнулась на такую ссылочку по теме. Вроде бы ее пока не упоминали. http://www.sgu.ru/faculties/biological/dep...logy/docs/1.doc
alstro
Всем привет, что-то совсем заглохла тема biggrin.gif
Mirek
Похоже, никто сейчас опытов не проводит. Alstro, может быть Вы что-нибудь свеженькое расскажете?
Honey
Если бы я знала КАК проводить подобные опыта, уже давно бы этим занималась smile.gif
Расскажите ....
Natasha
Вот у Жени и надо спросить ,как его опыты прошли.Он ведь собирался заняться меристемным микроклонированием фиалок.
alstro
Для общего ознакомления приведенных вот этих ссылок bio-technology.nm.ru/, flowers31.narod.ru/dublication_inaflask.html достаточно. Сам я никогда не занимался меристемным размножением культур. Но в ближайшее время хочу серьезно занятся этим вопросом, а также селекцией альстромерии, поклонником которой я являюсь. На мой взгляд : сложно, но выполнимо . Особенно это касается сенполий, которые хорошо укореняются и дают множество розеток даже в обычной нестерильной воде. Основная сложность кустарного меристемного размножения заключается, как мне кажется не в обеспечении стерильности или необходимых компонентов , а в отсутствии практического опыта. Среды и т.д все это можно достать за деньги. Сестра у меня медработник, часто работает в лаборатории - выращивают там всякие микроорганизмы на питатель. средах. Поэтому теоритическая и практическая поддержка гарантирована. Занимаюсь селекцией для души, а вот меристема, в случае удачи это уже неплохой бизнес. А все разговоры в статьях про меристему мол, дорого в домашних условиях, сложно , чепуха - все усилия окупается стократно. Начну с роз и сенполий , как с наиболее легких культур в этом плане. О своих опытах буду сообщать , по мере возможности.
Honey
alstro, будем ждать отчетов о ваших опытах с большим нетерпением.
А пока лично я пошла изучать ссылки smile.gif
Selena
Фиалки и без мерисистемы дают ТАКОЕ количество потомства,что впору лавку открывать.Огромное количество детворы требует сответствующего количества времени на уход.
Мое мнение,ну не стоит овчинка выделки.
alstro
Цитата(Selena @ 10.2.2009, 19:14) *

Фиалки и без мерисистемы дают ТАКОЕ количество потомства,что впору лавку открывать.Огромное количество детворы требует сответствующего количества времени на уход.
Мое мнение,ну не стоит овчинка выделки.

Уважаю Ваше мнение, но... 1.Сенполия будет использоваться мной прежде всего в экспериментах ,по причине указанной выше. 2.Цветы -это не только мое страстное увлечение, но и бизнес, так что с временем все в порядке. 3. Благодаря меристеме можно получить практически 100% здоровый , а самое главное безвирусный материал. Ну , а по поводу количества посадочного материала получаемого при меристеме и любого другого способа размножения растений(кроме семенного) не могу согласиться. Тем более , что рентабельность во многом зависит от культуры. К сведению один корень альстромерии купленный мной в 2008 году стоит 13 евро, а приобрел я 700 саженцев. Скоро цветение, выложу фото если кого интересует.
Selena
И я ваше мнение уважаю wink.gif . Просто мой ответ скорее Светлане предназначался smile.gif .
У нас фиалки больше увлечение,которое может приносить некоторый доход(при желании разумеется) и ставить все это на поток cool.gif .У нас же и места постоянно не хватает laugh.gif .
SergeyA.
alstro
Во многом согласен. Возможность размножения растений in vitro в домашних условиях при большом желании вполне осуществима. Но хочу подчеркнуть, что выращивание бактерий и грибов и выращивание растительных и животных тканей на питательных средах - две большие разницы. Осуществление второго - куда более сложная задача.
Пчеловодов Леонид
Цитата(Selena @ 10.2.2009, 19:14) *

Фиалки и без мерисистемы дают ТАКОЕ количество потомства,что впору лавку открывать.Огромное количество детворы требует сответствующего количества времени на уход.
Мое мнение,ну не стоит овчинка выделки.



Это да smile.gif Был бы у нас другой спрос - другое делоsmile.gif
Женя
Ребята, всем спасибо, что помните. С опозданием, но все же. Рассказываю: получилось 15 пробирок готового пит. раствора. Все делал по инструкции, к тому есть специальное руководство по биотехнологии. Автоклав нашел у мамы на работе - в больнице! Все простирилизовал, но не было гормонов. Читал, что на первом этапе можно без него, но зато добавил все нужные микроэлементы и витамины. Агар был хорошим. Из 15 пробирок, одна побилась. Остальные 6 пробирок примерно через 1 неделю заплесневели и оставшиеся 8 пробирок стояли колом, ничего не росло, каллюса даже не было, так росло где-то 3месяца. Света , мне кажется, было достаточно , 2 лампы (одна фито), непосредственно "висели" около самих ламп. Но "наплыва" похожего на каллюс не наблюдалось. Короче, где-то месяц назад, т.е. в январе все выкинул. Смотрел растения - ни каллуса, ни корешка!!! Опыт не удался, видимо, все-таки гормоны для фиалок ОБЯЗАТЕЛЬНЫ, даже для образования меристемной каллюсной ткани. Мне кажется, что стерильность тоже была плохая, несмотря на то, что закладывал в процедурном кабинете, где всю ночь горела кварцевая лампа! Все-таки надо спец оборудование - спецкомната, ламинар шкаф ит.д.
Принципе, если задаться коммерческой целью, так сказать, выращивать в масштабах огромной теплицы, то можно заниматься микроклональным размножением сенполий. Но это не рентабельно, да и не очень перспективно, ведь никто не хотел бы иметь 2-3 тысячи Голубых Драконов или несколько тысяч Богинь Красоты! Ведь фиалки и листом чудно размножаются, тем более стерильность дома создать ОЧЕНЬ трудно, да и набор гормонов стоит не менее 100$ Тогда стоит заниматься ради "Получится или нет!?" Хотя многие немецкие фирмы с успехом занимаются микроклональным размножением орхидей и д.р. растений. Но это большие фирмы, у которых это работа, а не ШКОЛЬНЫЙ ИНТЕРЕС!
Всем удачи, особенно "ищущим"!!!
Женя
Кстати, забыл написать, у нас студенты брали готовые заложенные материалы картофеля в каком-то научно-исследовательском университете в Брестской области для написания дипломной работы. Наблюдали за ростом и развитием... Результаты положительные, получились красивые, здоровые растения. Тема работы: "Микроклональное размножение. Получение здорового материала..." (как-то так звучит).
Так что нет ничего невозможного!!!
liana
Кстати, Микроклональное размножение применяется с успехом у нас, на минщине в одном частном хозяйстве под Смолевичами. Там размножают и продают саженцы голубики очень многих сортов и Рододендронов. Точно знаю.
игорь.
прочитав эту тему решил ответить... я занимаюсь биотехнологией растений поэтому позволю себе несколько комментариев по прочитанному.
1. на первых этапах после изоляции присутствие фитогорманов обязательно!!! наиболее доступный бап 0,2-1 мг/мл стандарт 0,5 , можно из ряда дифинилмочевины но если будет перидоз фигово будет.
вместо ламинара можно пожух сделать скажем из фанеры и уф лампу туда пихнуть( во время работы выключать надо)
среды в пробирках готовить не серьезно, микроэлементы по милиграму взвешивать же не будете, мы готовим маточный раствор х10 потом дистиллятом доводим
стерилизовать можно дробным кипячением или в скороварке...
самое ответственное мероприятие это выделение меристем, но до меристем ковырять не рекомендую достаточно снять несколько покровных чешуй, я сенполии не ковырял поэтому трудно объективно оценить. первые почки скорее всего заростут, поэтому не отчаивайтесь, с опытом все придет....и от физиологического состояния почек многое зависит
можно попробовать отстерилизовать розетку, отрезать отмершие ткани и в пробирки, а как начнут отростать новые побеги их отрезать и посадить на бап. мешать добавлять цитокинины при размножении не рекомендую, может каллус пойти а тут уже наверное прощай сорт...надеюсь кому то моя писанина поможет, будут вопросы пишите
Mirek
А в работе над какими растениями у Вас есть опыт?
игорь.
Цитата(Mirek @ 9.5.2010, 18:32) *

А в работе над какими растениями у Вас есть опыт?


занимаюсь ягодными и немного декоративными сейчас с гейхерками, хостами немного заморачиваемся)))
Cassandra
Жаль, что такая темка заглохла...
Октава
Цитата(игорь. @ 9.5.2010, 19:45) *

прочитав эту тему решил ответить... я занимаюсь биотехнологией растений поэтому позволю себе несколько комментариев по прочитанному.
1. на первых этапах после изоляции присутствие фитогорманов обязательно!!! наиболее доступный бап 0,2-1 мг/мл стандарт 0,5 , можно из ряда дифинилмочевины но если будет перидоз фигово будет.
вместо ламинара можно пожух сделать скажем из фанеры и уф лампу туда пихнуть( во время работы выключать надо)
среды в пробирках готовить не серьезно, микроэлементы по милиграму взвешивать же не будете, мы готовим маточный раствор х10 потом дистиллятом доводим
стерилизовать можно дробным кипячением или в скороварке...
самое ответственное мероприятие это выделение меристем, но до меристем ковырять не рекомендую достаточно снять несколько покровных чешуй, я сенполии не ковырял поэтому трудно объективно оценить. первые почки скорее всего заростут, поэтому не отчаивайтесь, с опытом все придет....и от физиологического состояния почек многое зависит
можно попробовать отстерилизовать розетку, отрезать отмершие ткани и в пробирки, а как начнут отростать новые побеги их отрезать и посадить на бап. мешать добавлять цитокинины при размножении не рекомендую, может каллус пойти а тут уже наверное прощай сорт...надеюсь кому то моя писанина поможет, будут вопросы пишите

Может быть, на практике это и приносит выгоду, но я прочитала и глаза на лоб полезли. Неужели кто-то в домашних условиях делает такие опыты? Гораздо проще не извращаться, а подождать, пока само вырастет. Конечно, некотовые экземпляры плохо разрастаются, да и для тех, кто на продажу растения готорит, это необходимо. Но обыкновенным любителям и коллекционерам, по моему - овчинка выделки не стоит.
Cassandra
Не, ну так понятное дело, что для тех, кто только домашним цветоводством занимается, этим заморачиваться не стОит... Хотя вот мне, к примеру, интересно весь этот процесс увидеть, "пощупать руками". Любопытная очень.
Кстати, зря говорите, что в домашних условиях этим никт не занимается. Читала много инфы на эту тему: очень многие занимаются, используя СВЧ-печи, пароварки для этих целей smile.gif Но, конечно, у нас тут простым смертным сложно найти питательный раствор и ингридиенты для него. В России с этим попроще. Там и экспериментируют.
julia
Здравствуйте huh.gif
Прошу поделиться опытом тех, кто уже пробовал проводить домашние эксперименты по микроклонированию.

Главный вопрос: каким образом создавали "стерильную комнату" в условиях обычной квартиры?

Цитата
Кстати, зря говорите, что в домашних условиях этим никт не занимается. Читала много инфы на эту тему: очень многие занимаются, используя СВЧ-печи, пароварки для этих целей Но, конечно, у нас тут простым смертным сложно найти питательный раствор и ингридиенты для него. В России с этим попроще. Там и экспериментируют.


- Cassandra, если не затруднит, дайте, пожалуйста, ссылочки на приведенные Вами примеры домашних опытов! - мои поиски информации в интернет были не столь успешны... wub.gif

я- из Украины, и, насколько мне известно, у нас подобными опытами не занимается никто, кроме научных сотрудников, окружающих себя ореолом таинственности! буд-то микроклональное размножение - тайна за семью печатями!!! cool.gif нашелся, правда, "добрый человек" - дал методичку 80-х годов - там, говорит, как раз те технологии описаны, что доступны будут и в домашних условиях.

однако, камнем преткновения для меня стали уже первые главы об оборудовании лаборатории: упуская некоторые моменты, как, например, стерилизацию инструментария промыванием в серной кислоте( cool.gif ), создание, даже приблизительных к требуемым условий - очень не простая задача! unsure.gif


не хочу так просто расставаться с мечтой! fly.gif уповаю на Вашу помощь!!! ohmy.gif
julia
Похоже, тема заглохла... no.gif

Отзовитесь, пожалуйста! biggrin.gif ohmy.gif
михаил
Цитата
Главный вопрос: каким образом создавали "стерильную комнату" в условиях обычной квартиры?
Такую информацию лучше искать в литературе по орхидеям, собственно технология не отличается от посева орх. Подробно о посеве орхидей на такую среду в ДОМАШНИХ условиях написано например в книжке "Орхидеи" Герасимова и Журавлёва, её можно найти в интернете. В принципе микроклональное размножение in vitro разных растений различается только составом среды.
Это текстовая версия — только основной контент. Для просмотра полной версии этой страницы, пожалуйста, нажмите сюда.
Русская версия Invision Power Board © 2001-2019 Invision Power Services, Inc.